Главная


Самый дорогой, westminster 2479 настольный футбол.

Локус гена Сн

Сейчас принято считать, что в процессе развития В-клетки первым из Ig продуцируется IgM. Впоследствии клетка и все ее потомство, продолжая синтезировать антитела с теми же V-областями L- и Н-цепей, может изменить изотип Н-цепи. Об этом свидетельствуют, кроме других, и следующие данные: а) переключение изотипа в ходе иммунного ответа; б) способность клонов В- клеток — миелом и селезеночных узелков — экспрессировать наряду с IgM и другой изотип с идентичной V-областью и в) данные опытов in vivo, указывающие на то, что IgM-продуцирующие клетки служат предшественниками IgG-продуцентов. Молекулярный механизм, с помощью которого клетка может специфически изменить одну часть молекулы синтезируемого ею белка, оставив другую часть без изменений, представляет большой интерес.

Как уже упоминалось выше, рядом авторов было показано, что активно перестроенные гены α, γ2b и γ1 содержат между V- и С-областями последовательность ДНК, происходящую из 5'-фланкирующей области гена μ (включая области JH). На основании этих данных была предложена модель, согласно которой FH-гeнпервоначально перестраивается в область, расположенную с 5'-стороны от гена μ (при этом продуцируется IgM), а впоследствии СH-область гена μ заменяется на другой ген (соответственно изменяется и изотип синтезируемого Ig). Хотя эта модель получила всеобщее признание, она не дает полного описания механизма переключения, так как не отвечает на ряд интересующих нас вопросов: какие последовательности участвуют в переключении или служат для него сигналом? Каким образом СH-области располагаются в хромосоме? Существуют ли последовательности JH вблизи других генов СH, кроме гена μ? Обязательна ли для переключения делеция генов CH-области из клетки, или же возможны и другие механизмы переключения (например, обмен между сестринскими хроматидами)? Каким образом можно объяснить существование клеток, синтезирующих одновременно с IgM другой изотип (двойные продуценты)?

В 1978 г., еще до получения геномных клонов СH, Хонжо и Катаока провели эксперименты, позволившие дать частичный ответ на некоторые из этих вопросов. Из кДНК, синтезированной на мРНК, выделенной из четырех различных миелом и очищенной при помощи иммунопреципитации полисом, были получены радиоактивно меченные зонды. Эти зонды для генов γ1, γ2a, γ2b и γ3 использовались для определения числа копий генов каждого изотипа в нескольких миеломах путем анализа кинетики гибридизации. Выло обнаружено, что в IgM- или IgGS-продуцирующих миеломах содержатся все четыре гена γ, каждый в количестве одной копии на гаплоидный геном (как в нелимфоидных тканях), тогда как в IgA-продуцентах все четыре гена γ представлены лишь 0,5 копиями каждый. Из этих данных следует, что в IgA-продуцирующей миеломе произошла делеция генов μ и α. Аналогичный анализ миелом, продуцирующих IgGl, IgG2a и IgG2b, позволил установить относительное расположение генов СH в хромосоме, исходя из предположения, что образование данного изотипа сопровождается делецией всех генов СH, расположенных с 5'-стороны от гена СH этого изотипа. Предложенный порядок расположения генов: μ-γ3-γ1- γ2b-γ2а-α — был подтвержден в последующих экспериментах. Например, несколькими группами авторов для определения содержания различных генов СH в миеломах был использован метод блоттинга по Саузерну. При таком подходе количественные результаты получить труднее, чем при гибридизации в растворе, а присутствие генов СH в неэкспрессируемой хромосоме создает потенциальные трудности для выявления делеций тех же генов из экспрессируемой хромосомы. Получить однозначные результаты, однако, оказалось возможным при использовании миелом, в неэкспрессируемой хромосоме которых был утерян весь локус Сн или его часть, так что делеции в экспрессируемой хромосоме можно было наблюдать без мешающего влияния последовательностей этого локуса. Яоита и Хонжо решили эту проблему иначе. При изучении миелом, индуцированных у мышей (BALB/c х C57BL)F1, они смогли проанализировать различные гены СH независимо на экспрессируемой и неэкспрессируемой хромосомах, так как два родительских гена при блоттинге по Саузерну давали различные наборы полос. Результаты всех этих работ подтвердили при-веденное выше расположение генов и делеционную модель.