Главная


раскодирование от алкоголизма

Синтез и оборот фосфолипидов

Фосфатидилинозитол (ФИ) представляет собой минорный компонент (обычно <10%) фосфолипидов клеточной мембраны млекопитающих. Тем не менее для самых разнообразных клеток характерный ранний ответ на внешние воздей-ствия заключается в избирательном ускорении оборота именно этого фосфолипида. Наиболее ранним изменением, происходящим в тромбоцитах, стимулированных тромбином в первые несколько секунд, а в лимфоцитах, стимулированных с помощью ФГА или Кон А за 5 мин, оказывается превращение примерно 10% ФИ в 1,2-диацилглицерол и водорастворимые инозитолфосфгсгы, один из которых — это миоинозитол-1,2-циклофосфат. Фосфоли- паза С, осуществляющая эту реакцию, находится в цитоплазме, а не в клеточной мембране, и хотя для ее функционирования необходимо наличие низких концентраций Са2+, активация фосфолипазы С не зависит от внешнего кальция. Фосфатные группы затем вновь включаются в диацилглицерол с образованием CDP-диацилглицерола, а при добавлении инозитола опять получается ФИ. Поэтому наиболее прямым методом определения первой стадии оборота компонентов ФИ является измерение количества водорастворимой формы 32Р, предварительно включенного в ФИ. Но самый удобный способ связан с регистрацией включения 32Р-фосфата в ФИ, которое в присутствии митогена ускоряется на много часов. Специфические ингибиторы ферментов цикла ФИ не известны, и отчасти поэтому отношение оборота ФИ к более поздним активацион- ным процессам пока не выяснено. Было предложено много различных гипотез, касающихся роли этого процесса в осуществлении локальных изменений липид- ного состава мембраны, регулировании потока Са2+ клетки, а также, возможно, в выполнении миоинозитол-1,3-фосфатом функции, аналогичной функции циклических нуклеотидов. Не так давно была описана протеинкиназа, активируемая с помощью Са2+ и диацилглицерола, и отличающаяся от киназ, активируемых циклонуклеотидами. Фосфолипидсвязывающие вещества, такие, как хлор- промазин, могут ингибировать активацию лимфоцитов, препятствуя работе этой киназы. Циклические нуклеотиды не ускоряют оборот ФИ, т. е. они, по-видимому, действуют на более поздней стадии активации.

Оборот ФИ можно вызвать с помощью разных митогенных (но не немито- генных) лектинов. Для этого необходима сшивка рецепторов, что было показано на примере В-клеток свиньи, в которых обмен начинался после добавления целых молекул антител против иммуноглобулинов и не возникал при добавлении Fab-фрагментов этих же антител. К сожалению, в В-клетках других видов обнаружить аналогичный ответ на добавление таких митогенов, как МФЛ или ЛПС, оказалось довольно трудно.

В большинстве клеток оборот ФИ, измеряемый по включению 32Р-фосфата в ФИ, ускоряется значительно раньше и значительно сильнее, чем синтез ФИ de novo, измеряемый по включению 3Н-глицерола. Однако в лимфоцитах человека Кон А и 'ФГА в течение первого часа также стимулируют рост синтеза ФИ de novo, при этом синтез и другирг фосфолипидов также увеличивается.

Синтез фосфатидилхолина (ФХ) de novo тоже начинает линейно возрастать примерно через 1 ч после стимуляции Т-клеток митогеном, по-видимому после начала трансметилирования фосфолипидов. Обычно синтез ФХ измеряется по включению 14С-холина, наблюдаемому одновременно с включением 32Р-фосфата или глицерола в ФХ. Около 90% холина, включенного в фосфолипид, обнаруживается в ФХ. Хотя в покоящихся лимфоцитах нормальная скорость обмена компонентов мембраны и так довольно значительна, тем не менее ФГА и Кон А индуцируют четырех-пятикратное ее увеличение примерно к четвертому часу.

В покоящихся лимфоцитах включение жирных кислот в ФХ происходит в 100 раз более интенсивно, чем включение холина (т. е. превышает скорость синтеза ФХ). Тем не менее скорость включения жирных кислот также увеличивается в три раза через 10 мин после добавления ФГА. Ацил-СоА-лизолицитинтрансферазы, ответственные за повторное включение жирных кислот в мембрану, высокоизбирательны по отношению к длинным ненасыщенным жирным кислотам с несколькими двойными связями, например к арахидоновой кислоте. Высокая скорость включения холина и жирных кислот поддерживается по крайней мере в течение двух дней, что связано с увеличением общего количества вещества мембраны в расчете на одну клетку. Однако если митоген удалить, то включение жирных кислот возвращается к нормальному для покоящихся клеток уровню в течение трех часов, т. е. для поддержания высокого уровня включения необходимо постоянно стимулировать клетку митогеном.